退火温度怎么确定高低（退火温度怎么确定）

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1、退火温度的计算公式为：4 (g+c)+2 (a+t)-(5 ~ 8)。

2、AnnealingTemperature是引物和模板结合时的温度参数，是50%的引物和互补序列为双链DNA分子时的温度。

3、它是影响PCR特异性的重要因素。

4、理想情况下，退火温度应足够低以确保引物与靶序列的有效退火，并足够高以减少非特异性结合。

5、合理的退火温度为55 ~ 70。

6、退火温度一般设定在比底漆的Tm低5。

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